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ARTIGOS


Desenvolvimento e validação in vitro de um imunoensaio PTA-ELISA para determinação de estradiol plasmático em bovinos

Autores
Keila Maria Roncato Duarte, Luiz Humberto Gomes, Rita Maria Ladeira Pires, Daniel Padrão, Ivani Pozar Otsuk

Resumo

Um método simples e sensível foi desenvolvido para determinação de estradiol plasmático em bovinos por ensaio imunoenzimático do tipo “Plate trapped Antigen – Enzyme linked Immunosorbent assay” (PTA-ELISA). Coelhas foram imunizadas (incluindo a aplicação de reforços a cada 20 dias) com o conjugado valerato de estradiol-BSA. O soro produzido apresentou grande afinidade para determinação de a-17-estradiol e b-17-estradiol. Quantidades conhecidas de estradiol 17-a e 17-b (1 a 100.000 pg mL- 1)  foram diluídas em PBS e em soro livre de esteróides de fêmeas bovinas para determinação da curva de calibração e determinação da sensibilidade do ELISA. O método mostrou grande sensibilidade (detecção de 1ng por mL) e repetibilidade (desvio padrão de 0,0075 e 0,0125 para alfa e beta estradiol, respectivamente). Falta por testar se o método é igualmente eficiente para detectar concentrações plasmáticas de estradiol em diferentes períodos do ciclo estral bovino.

 

Palavras-chave: anticorpo policlonal, ensaio enzimático, estradiol

 

Development and validation of an immunoassay (PTA-ELISA) to plasmatic bovine estradiol

 

Abstract: A simple and sensitive method was developed to determine estradiol in bovine, using a plate-trapped immunoassay – Enzyme immunosorbent immunoassay type. Female rabbits were immunized with valerato estradiol bioconjugated to BSA, with boosters at each 20 days). The antiserum produced showed high affinity to a-17-estradiol and to 17-b-estradiol. Estradiol standards (range: 1 to 100,000 pg mL - 1) , in bovine sera steroids free were used to determine the sensibility of ELISA. The test showed good sensibility (1ng per mL), good replicate average (SD: 0,0075 and 0,0125 for alfa and beta estradiol, respectively). There are still some studies to be done to determine plasmatic concentrations of estradiol during bovine estrus cycle, using this methodology.

 

Keywords: enzyme assay, estradiol, polyclonal antibodies

 

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